طريقة تعين نسبة الكرياتينين فى الدم ( Jaffe Reaction)
تعتمد هذه الطريقة اللونية( Jaffe Reaction) على تفاعل الكرياتينين (الموجود فى السيرم أو البول) مع حمض البكريك القلوى(Alkalin Picric Acid ) فيعطى لون برنقالى محمر
العينات المستخدمة :(Sampls )
يمكن قياس الكرياتينين فى البلازما أو السيرم أوالبول (بشرط تجميع بول 24 ساعة للشخص المراد قياس الكرياتينين له)
أولا تقدير نسبة الكرياتينين فى الدم : Serum Creatinine
نأخذ من الشخص عينة دم وريدى توضع فى أنبوبة سنتر فييوج وتترك حتى تتجلط ثم تدار فى جهاز السنتر فيوج لفصل السيرم أو نستخدم مانع تجلط للحصول على البلازما (فى هذا الأختبار لا يشترط مانع تجلط معين)
فصل البروتين :- Deprotenization
تأتى خطوة فصل البروتين عن السيرم أو البلازما بواسطة مرسب البروتين(حامض ثلاثى كلوريد الخليك .T. C. A ) وهى كالآتى :
نأخذ فى أنبوبة سنتر فيوج 1 مللتر من السيرم أو البلازما يضاف اليها 1 مللتر من مرسب البروتين (.T. C. A ) ثم نرج جيدا نلاحظ تعكرمحتوى الأنبوبة بعد عملية الخلط تدار الأمبوبة فى جهاز السنتر فيوج ( الطرد المركزى) لفصل البروتين ونحصل من هذه العملية على المحلول الرئقSupernatant الذى يتم تقدير الكرياتينين فيه 0
المحاليل المستخدمة :- Reagents
1- المحلول القياسى تركيز : Creatinine standard 2.0mg/dl
2- حمض البكريك : (color reagent)
3 - هيدروكسيد الصوديوم : (Alkaline reagent)
يتم خلط المحلول 2 و 3 للحصول محلول البكريك القلوى (working solution) الذى يستخدم فى الإختبارمباشرة
طريقة عمل الاختبار :-
نقوم بتحضير ثلاثة أنابيب نظيفة جافة ونميزها بالرموز/ B / S / T /
- الأنبوبة Bوهى الخاصة بمحلول البلانك
- الأنبوبة Sوهى الخاصة بالمحلول القياسى
- الأنبوبة Tوهى الخاصة بعينة الأختبار
ثم نقوم بتنفيذ الجدول الموضح فى الأنابيب بأن نضع 1مللتر من المحلول الرئق فى أمبوبة العينة (T) نضع 5ر0 مللتر من المحلول القياسى فى أمبوبة (S) نضع 5ر0 مللتر من الماء المقطر فى أمبوبة (B) نضع 5ر0 مللتر من ( .T.C.A) فى كل من أمبوبة(ٍ S و B ) & نضع 1 مللتر من محلول البكريك القلوى فى الثلاث أنابيب 0 (يجب أن يكون مجموع حجم المحاليل فى الثلاث أنابيب يكون متساوى)
نترك الأنابيب مدة 20 دقيقة قبل عملية القراءة ثم يضبط جهاز قياس الألوان عند طول موجة ( 546 nm ) ثم يضبط صفر الجهاز على محلول البلانك (B) ثم نأخذ قراءة أمبوبة المحلول القياسى (S) و قراءة أمبوبة العينة (T) تسجل القراءة
B S T
1ml ---- ---- المحلول الرائق Supernatant
---- ml.,5 ---- المحلول القياسي Standerd
---- ---- .,5 ml ماء مقطر Dis.water
---- .5 مل .,5 مل T . C . A
1ml 1 ml 1 ml البكريك القلوي working solution
Mix , let stand for exactly 20 min at 20 - 20 c
الحساب :- Calculation
نسبة الكرياتينين فى البلازما = قراءة العينه \ قراءة المحلول القياسي × 2
السبت 16 أغسطس - 7:20
