السلام عليكم ورحمة الله وبركاتة
سبق وان شرح أخونا عاشق التحاليل تقنية Pcr فشكرا له وهذه اضافة
اضغط هنا وتمتع بالصوت والصورة
http://www.biocompare.com/tutorials/fast_pcr/index.asp
تعرف هذه التقنية بالتفاعل السلسلي لإنزيم بلمرة الحامض النووي DNA وتعتمد فكرة هذا التفاعل على إمكانية تضخيم Amplification وإكثار وعمل ملايين النسخ من أي حامض نووي دون الحاجة لعزلة، حيث يمكن لهذا التفاعل أن ينتج 100 مليار جزيء من الـDNA من جزيء واحد فقط في لحظة البدء وخلال 6 ساعات فقط.
متطلبات تقنية PCR
الحامض النووي المزدوج Double Stranded المحتوي على الجزء المطلوب نسخه.
بادئ محضر صناعيا معروف نظام تعاقبه Oligannucleotid primer ويتكون من 20 نيوكليوتيدة .
أنزيم بلمرة خاص مقاوم للحرارة ، ونجح الباحثون في الحصول على هذا الإنزيم وعزله من البكتريا المحبة للحرارة العالية المعروفة باسم Thermus aquatic
خطوات تنقية الـ PCR:
1) يتم فصل الحلزون المزدوج لشريطي الحامض النووي إلى خيط مفرد عن طريق عملية الدنترة (المسخ) Denaturation بتسخينه إلى درجة حرارة من 94-95مْ.
2) يضاف البادئ المعروف تسلسله النووي إلى الحامض النووي المفرد و تتم بعد ذلك عملية تبريد وتقوية Annealing بخفض درجة الحرارة إلى 37مْ -65مْ اعتمادا على مدى التطابق بين البادئ المستخدم والحامض النووي.
3) يتم استطالة Extension للحامض النووي عند درجة 70-75مْ باستخدام الإنزيم المقاوم للحرارة.
يتم تكرار الثلاث خطوات من التسخين وتقوية واستطالة للحامض النووي باستخدام نفس الإنزيم السابق حتى يتم الحصول في النهاية على Unit length double stranded DNA .
وحاليا يستخدم جهاز ذاتي يعمل بمضاعفة جزيئات حامض DNA ويعرف باسم Automated Thermal Cycler وهو يستخدم الآن على نطاق واسع في معامل الأبحاث. وفي هذا الجهاز ترتفع درجة الحرارة آليا لإتمام عملية فك الشريط الحلزوني ثم تنخفض آليا لإتمام بناء الشريط
الإثنين 18 أغسطس - 16:38
