الرئيسيةالبوابةس .و .جالتسجيلدخول

شاطر | 
 

 اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG

استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي اذهب الى الأسفل 
كاتب الموضوعرسالة
ابـو الولـيد
اداري
اداري


ذكر
عدد المساهمات : 907
تاريخ التسجيل : 01/08/2008

مُساهمةموضوع: اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG   الأحد 10 أغسطس - 7:07

اختبار الطرق المناعية الأنزيمية ( اليسا ( ELISA لفحص هرمون B-HCG

هدف التجربة:
1.يقدم هذا النشاط للطالب لمحة عن تحاليل الكيمياء الحيوية من خلال الكشف عن وجود هرمون الحمل HCG في عينه (اصطناعية) لمصل دم أو عينة بول بواسطة طريقة اليسا ELISA.


الأدوات والمواد المستعملة:
1.آبار التفاعل المغطاة بالأجسام المضادة.
2.الأنزيمات المقترنة بالأجسام المضادة.
3.محلول CRSB (يحتوي على مولد اللون (chromogen)) والمتفاعل (Substrate).
4.مرجع للنتيجة السلبية.
5.مرجع للنتيجة الايجابية.
6.حامل لآبار التفاعل.
7.قطاره بلاستيكية.


المقدمـة:
فحص (enzyme–linked immunosorbent assay - ELISA) أو الطرق المناعية الإنزيمية لهرمون HCG يستعمل لمعرفة إذا كانت المرأه حامل أم لا باستعمال عينة بول أو دم. تقوم البويضة الملقحة عند بلوغها حوالي أربعة أيام بإفراز هرمون (HCG) الذي يتكون من جزئي بيتا وألفا. الجزيء بيتا من هرمون HCG يعطي الخصوصية البيولوجية والمناعية لهرمون الحمل، ولذلك فان خصوصية بيتا – HCG عامل حساس عندما يكون مستوى HCG منخفض جداً في العينة المراد فحصها.
طريقة اليسا (ELISA) لفحص HCG عالية الحساسية والخصوصية التي تتضمن أنزيم (عامل مساعد في التفاعلات الكيميائية، وأيضاً تتضمن أجسام مضادة (جزيء صناعي) التي تسمح بتحديد سريع وسهل لوجود الهرمون في الدم أو البول حتى لو بكميات قليلة.


مبدأ عمل الفحص:
عندما يكون الفحص ايجابياً، يرتبط هرمون HCG بواسطة جزيء بيتا بالأجسام المضادة الملتصقة ببئر التجربة، والإنزيم المقترن بالأجسام المضادة (antibody enzyme-conjugate) يرتبط بالجزيء الغير مرتبط من HCG ، وبعدها يضاف المنظار (substrate) ومولد اللون (chromogen) اللذان يحفزان بواسطة الإنزيم على إنتاج اللون الأزرق (شكل 1).
في حالة سلبية الفحص، عدم وجود هرمون HCG يمنع ارتباط الأنزيم المقترن بالأجسام المضادة، ولذلك لن يكون هناك أنزيم لكي يعمل كعامل مساعد، فيكون الفحص بدون لون.

شكل 1: مبدأ عمل الفحص


طريقة العمل:
1.ضع نقطة 50 ميكروليتر من عينة المريض ونقطة من المرجع السلبي ونقطة من المرجع الايجابي في آبار التفاعل على الترتيب.
2.أضف نقطة 50 ميكروليتر من الإنزيمات المقترنة بالأجسام المضادة لكل بئر (Antibody-enzyme).
3.حرك لكي يتم المزج واحفظها بدرجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
4.قم بغسل آبار التفاعل خمس مرات بواسطة الماء.
5.أضف نقطة 50 ميكروليتر من CRSB لكل بئر.
6.حرك جيداً لكي يتم المزج ثم قم بحفظها بدرجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق أو إلى 20 دقيقة على الأكثر.
7.قارن الألوان الناتجة عن العينة بالمراجع الايجابية والسلبية.

الأسئلة:

1-لماذا استخدم فحص اليسا ELISA في هذا النشاط

2-أكثر أهمية ولماذا ؟( HCG ) 2- أي جزء من هرمون الحمل

3-كيف نستطيع معرفة إذا كان الفحص ايجابيا أم سلبيا ؟

4-ماذا يحدث إذا لم يتم غسل أبار الفحص بماء الصنبور في الخطوة رقم 4 ؟



إجابة أسئلة فحص اليسا ELISA

1- لماذا استخدم فحص اليسا ELISA في هذا النشاط
يتم استخدام هذا الفحص للكشف إذا ما كانت السيدة حامل أم لا باستخدام عينة دم أو بول .

2- أي جزء من هرمون الحمل HCG أكثر أهمية ولماذا ؟
جزء بيتا Beta subunit هو الأكثر أهمية وذلك لأنها تطفي الخاصية البيولوجية والمناعية لهذا الجزيء .إذن خصوصية B-HCG تكمن في أهميه هذا العامل عند قياس كميه قليلة من HCG في العينة.

3- كيف نستطيع معرفة إذا كان الفحص ايجابيا أم سلبيا ؟
إن الدليل على ان الفحص ايجابيا هو ظهور اللون الأزرق , أما إذا كانت العينة خالية من هرمون B-HCG فتظهر نتيجة الفحص عديمة اللون .

4- ماذا يحدث إذا لم يتم غسل أبار الفحص بالماء في الخطوة رقم 4 ؟
سوف نحصل على نتيجة خاطئه لان الماء يزيل المواد غير المتفاعلة من جدار البئر فإذا لم يتم غسل أبار الفحص سوف تحلل الإنزيمات غير المرتبطة (الحرة ) التفاعل وتعطي نتيجة ايجابية.
الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
hemato
عضو فضي
عضو فضي


ذكر
عدد المساهمات : 546
تاريخ التسجيل : 13/08/2008

مُساهمةموضوع: رد: اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG   الأربعاء 13 أغسطس - 1:16

جزاك الله خير أخي أبو الوليد
الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
hanin-83
عضو جديد
عضو جديد


انثى
عدد المساهمات : 6
العمر : 33
تاريخ التسجيل : 31/08/2008

مُساهمةموضوع: رد: اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG   الأحد 31 أغسطس - 6:28

جزاك الله خيرا
الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
amany farag
عضو ذهبي
عضو ذهبي


انثى
عدد المساهمات : 635
العمر : 50
تاريخ التسجيل : 07/06/2009

مُساهمةموضوع: رد: اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG   الإثنين 8 يونيو - 11:04

جزاك الله خيرا
الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
 
اختبار ELISA لفحص الحمل B-HCG
استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي الرجوع الى أعلى الصفحة 
صفحة 1 من اصل 1

صلاحيات هذا المنتدى:لاتستطيع الرد على المواضيع في هذا المنتدى
شبكة الابداع للتحاليل الطبية  :: منتديات التحاليل الطبية :: علم المناعة والفيروسات-
انتقل الى: