الرئيسيةالبوابةس .و .جالتسجيلدخول

شاطر | 
 

 طريقة تقدير كمية أنزيم الفوسفاتيز القاعدى

استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي اذهب الى الأسفل 
كاتب الموضوعرسالة
بنت الجنوب
عضو جديد
عضو جديد


انثى
عدد المساهمات : 20
العمر : 28
تاريخ التسجيل : 16/02/2009

مُساهمةموضوع: طريقة تقدير كمية أنزيم الفوسفاتيز القاعدى   الإثنين 16 فبراير - 23:58

- المبدأ العام :
تقدم أنزيمات الفوسفاتيز بتسريع تميؤ استرات الفوسفات . ومن الناحية الطبية هناك نوعان من أنزيمات الفوسفاتيز ، وكلاهما يقومان بالدور نفسة ، ولكنهما يختافان عن بعضهما البعض بدرجة الرقم الهيدروجينى ( PH ) للوسط التى يظهر نشاط كل منهما .
هناك عدة طرق لقياس نشاط أنزيم الفوسفاتيز القاعدى ( الذى يظهر نشاطة بالشكل الأمثل عند PH = 9.80 ) وستستخدم طريقة بريزى
ولورى وبروك ( Breaaey - Lowry - and Brock ) المعتمدة من قبل الاتحاد العالمى للكيمياء الطبية وهى تتلخص فى عملية
تميؤ مادة التفاعل بارا - نيتروفينيل فوسفات أنزيميا إلى بارا - نيتروفينولوفوسفات فى وجود مستقبل لمجموعات الفوسفات هو ثنائى
ايثانول الأمين الذى يلعب دورا منظما . ويقاس لون بارافينول الأصفر الذهبى فى الوسط القاعدى . وعدل التغير فى شدة امتصاص هذا المركب تتناسب طرديا مع كمية نشاط أنزيم الفوسفاتيز القاعدى فى العينة المستخدمة .

- الأجهزة والأدوات والمواد المستعملة :
جهاز مطياف ضوئى - أنابيب اختبار - ماصات آلية - حاضنة أو فرن - ساعة إيقاف - مجموعة الكواشف والمواد والمحاليل الخاصة بالتجربة المتوفرة ( تختلف هذة الكواشف فى طريقة تحضيرها وفى المواد الحافظة المضافة إليها بين منتج وآخر ) وبالنسبة لهذة
التجربة فهى تحتوى : كاشف المحلول المنظم ومادة التفاعل - مصلا حديثا أو بلازما المحضرة بإستخدام الهيبارين فقط .

- خطوات العمل :ا - تحضير الكواشف المستعملة : تقرأ نشرة التعليمات المرافقة فى صندوق العبوات والتى تحتوى على الأنزيم - مادة الهدف التى
تحتوى باراانيتروفينيا فوسفات إما على هيئة أقراص ( حيث يستعمل قرص لكل تجربة ) أو على هيئة وزن معلوم من مسحوق متجمد
داخل عبوة ( تكون صلاحيتها حسب النوع والمنتج ) . وعادة ما تذاب العبوة أو القرص فى جحم معلوم من المحلول المنظم ، وذلك
طبقا للتعليمات الموجودة .
بالإيضافة لمادة الهدف يوجد أيضا فى صندوق الكواشف ، كاشف المحلول المنظم ( عند رقم هيدروجينى 9.8 =PH ) الذى يحتوى
المادة التنشيطية التنظيمية الكحول الأمينى ثنائى ايثانول أمين وكلوريد الماغنيسيوم وأزيد الصوديوم الذى يستخدم كمادة حافظة .
هذا ويبقى الكاشف العملى المحضر لمدة شهر إذا حفظ فىالثلاجة عند درجة حرارة تتراوح بين 2 - 8 درجة مئوية ولمدة اسبوع
واحد فقط إذا ترك فى درجة حرارة الغرفة .
ب - خطوات التجربة :
1 - يسخن الكاشف العملى المحضر والعينة وأنابيب الاختبار وأنبوبة الجهاز ( Cuvete ) عند درجة 30 درجة مئوية لمدة عشرة دقائق
ويجب المحافظة على هذة الدرجة طيلة زمن التجربة مع حدودخطأ لا يتجاوز 0.5 درجة مئوية .
2 - ينقل بالماصة ( 2.5 مليلتر ) من الكاشف العملى إلى أنبوب اختبار جافة ونظيفة .
3 - ينقل بالماصة ( 50 ميكرولتر ) من العينة ( المصل أو البلازما ) إلى أنبوب الاختبار ثم يرج المزيج حتى يتجانس .
4 - يجهز المطياف عند طول موجى مقدارة 405 نانو متر ، ويكون المسار الضوئى ( 1 سم ) .
5 - يضبط الجهاز عند الصفر ضد الهواء ( لايوجد محلول قياسى ) .
6 - تقاس شدة الامتصاص للمحلول بعد مرور دقيقة واحدة .
7 - تشغل ساعة الإيقاف وتقاس شدة الامتصاص على فترات زمنية بين كل منهما دقيقة أى 3،2،1 .

- حسابات النتائج :
يتم تسجيل شدة الامتصاص ، وتحسب معدلات التغير فى شدة الامتصاص ، وتوضح فى جدول : الزمن - شدة الامتصاص A - معدل
التغير فى شدة الامتصاص .
ثم تجرى الحسابات :
- تحسب معدلات التغير فى شدةالامتصاص وذلك بطرح كل قراءة من التى تليها ، وتسجل هذة القيم فى الجدول المذكور فى العمود الثالث .
- يتم حساب المتوسط الحسابى لمعدل التغير فى شدة الامتصاص وذلك حسب المعادلة :
المتوسط الحسابى لمعدل التغير (A ) = مجموع التغير فى شدة الامتصاص ،على عدد القراءات ( عملية قسمة ) .- يتم تطبيق المعادلة التالية لحساب درجة نشاط الانزيم :

درجة نشاط الأنزيم = X Aالحجم الكلى للتفاعل على 6.3 x Mm x حجم العينة المستخدمة = .......... / مليلتر .حيث : 6.3 هو معامل الامتصاص الميليمو لارى للمرافق الأنزيمى عند الطول الموجى 340 نانو متر ودرجة حرارة الغرفة 30 درجة مئوية .
ولتحويل هذة الوحدات الناتجة إلى وحدة أنزيمية / لتر تضرب النتيجة فى 1000 ، حيث يكون هنا لمركب نيتروفينول عند 405 فينول
ودرجة حرارة 30 درجة مئوية ويساوى 18.75 .

- ملاحظات عامة :
1- يجب أن تكون عينة المصل لتقدير فعالية الأنزيم حديثة . أما إذا حفظت فى الثلاجة ( 2-08 م ) فإن الأنزيم يفقد 10% من فعاليتة
خلال ثلاثة أيام .
2 - يختلف معامل المتصاص باختلاف درجات الحرارة ، فهو يضرب بالمعامل 0.76 عند درجة 25 درجة مئوية وبالمعامل 1.98
عند درجة 37 درجة مئوية .
3 - إذا كان معدل التغير فى شدة الامتصاص لا يزيد على 0.250 أو كانت درجة نشاط الأ نزيم أعلى من 700 وحدة دولية / لتر عند
30 درجة مئوية فإنة يجب إعادة التجربة مع تخفيف العينة بمحلول فيسيولوجى ( كلوريد الصوديوم 0.9% ) بمقدار خمس مرات .
الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
شيخ المختبر
عضو مميز
عضو مميز


ذكر
عدد المساهمات : 236
تاريخ التسجيل : 11/09/2008

مُساهمةموضوع: رد: طريقة تقدير كمية أنزيم الفوسفاتيز القاعدى   الأربعاء 18 فبراير - 13:35

bsam::

الاخت بنت الجنوب

لقد تم منحك وسام التميز

مبروك يا مبدعه

بارك الله فيك


الرجوع الى أعلى الصفحة اذهب الى الأسفل
 
طريقة تقدير كمية أنزيم الفوسفاتيز القاعدى
استعرض الموضوع السابق استعرض الموضوع التالي الرجوع الى أعلى الصفحة 
صفحة 1 من اصل 1

صلاحيات هذا المنتدى:لاتستطيع الرد على المواضيع في هذا المنتدى
شبكة الابداع للتحاليل الطبية  :: منتديات التحاليل الطبية :: الكيمياء الحيوية والسريرية-
انتقل الى: